G-四链体与As-PCR联用可视化检测沙门氏菌

作者：刘健慧; 张先舟; 张蕴哲; 王红静; 李雪瑶; 耿凤珍^*; 檀建新^*

来源：中国食品学报, 2023, 23(05): 371-380.

DOI：10.16429/j.1009-7848.2023.05.037

• 不对称PCR
• 可视化检测
• 沙门氏菌
• G-四链体

沙门氏菌是食源性病原菌，常在食品媒介中传播，因此快速检测是控制该病原菌的关键。本研究用沙门氏菌基因组DNA作模板，通过对不对称PCR(As-PCR)扩增条件的优化，证明当非限制性引物HF终浓度0.4μmol/L，与限制性引物GR终浓度比10∶1、退火温度58℃，扩增40个循环时可获得最大浓度的单链DNA(ssDNA)产物。带有G-四链体序列的ssDNA与40μmol/L氯化血红素作用60 min时，G-四链体显示出最高的过氧化物酶活性。在此基础上，将As-PCR和G-四链体联用，实现了可视化检测沙门氏菌invH基因，在2 pg/μL～258 ng/μL的质量浓度区间，质量浓度对数与吸光值A421nm呈线性关系(y=0.0691x+0.3085,R2=0.9729)。对污染的牛奶样品检测，检出灵敏度高，为35 CFU/mL，且操作便捷，为病原微生物检测提供了新技术支撑。

• 单位
  河北农业大学; 河北大学附属医院; 河北民族师范学院