水稻叶绿体转化载体pBS的构建及融合基因功能的初步鉴定

作者：高婧; 李丁; 左佳; 贺荣华; 韩小霞; 邢俊杰; 李祺; 曹孟良

来源：生命科学研究, 2012, 16(05): 389-394.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2012.05.002

• 水稻
• 叶绿体转化
• bar基因
• 绿色荧光蛋白(sGFP)
• 融合PCR

利用PCR方法分别从载体pchN-CAT-Bar和Psk51中分离得到编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar和绿色荧光蛋白基因sgfp,并在bar基因前段连接T7 leader sequence/5′-UTR和T7 10 N-terminus的8个氨基酸序列.运用融合PCR技术,得到bar和sgfp的融合基因片段BS.以水稻叶绿体基因组中的trnI和trnA为同源重组片段,来自烟草叶绿体16S rRNA的Prrn为启动子,psbA基因的TpsbA为终止子,融合片段作为双效筛选标记,构建水稻叶绿体转化载体pBS.大肠杆菌原核表达检测到明显荧光,基因枪轰击TP309愈伤,筛选抗性愈伤.

• 单位
  国家杂交水稻工程技术研究中心; 杂交水稻国家重点实验室; 中南大学