hK1-L-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达及其活性研究

作者：邓春平; 陶建军; 侯永敏; 钟翎

来源：中国生物工程杂志, 2011, (03): 23-28.

DOI：10.13523/j.cb.20110304

• 激肽释放酶1
• 融合蛋白
• CHO细胞 Kallikrein 1 Fusion protein CHO cell

为进一步改造重组人激肽释放酶1(hK1),以期提高其生物活性,制备了通过柔性接头相连接的重组人激肽释放酶1-L-IgG1 Fc融合蛋白(hK1-L-Fc)。采用重叠延伸PCR技术构建hK1-L-Fc融合基因,克隆至表达载体pcDNA3.1,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S)中表达。利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、Western blotting、飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、HPLC检测表达产物,底物法检测融合蛋白的体外活性。结果显示:成功构建pcDNA3.1-hK1-L-Fc重组表达载体;获得稳定表达融合蛋白的细胞株;无血清悬浮批式培养的表达量在0....

• 单位
  中山大学; 广东天普生化医药股份有限公司