中药复方敷和备化方对CD133+HepG2肝癌干细胞增殖及相关自噬蛋白影响的机制

作者：李祖隆; 荣震; 孙华; 蒋锐沅; 钟晓婷; 莫春梅^*

来源：中国组织工程研究, 2022, 26(31): 4988-4995.

• 肝癌干细胞
• 敷和备化方
• PI3K
• AKT
• mTOR
• 通路
• LC3
• 自噬

背景：肝癌干细胞是肝癌不断发生发展和高异质性产生的关键细胞，目前尚无针对肝癌干细胞相关自噬通路为靶点的中药复方研究，因此中药复方抑制肝癌干细胞自噬的研究十分具有必要性。目的：探讨中药复方制剂敷和备化方对CD133+HepG2肝癌干细胞PI3K/AKT/mTOR通路及相关自噬蛋白影响的机制。方法：免疫磁珠法分选出CD133+HepG2细胞，用体积分数为2%,4%,8%,16%敷和备化方含药血清作用CD133+HepG2细胞，CCK-8法检测细胞增殖活力，选出最佳干预体积分数的敷和备化方含药血清。将CD133+HepG2细胞分为血清对照组、空白对照组、雷帕霉素组和敷和备化方组，分别用含体积分数16%空白大鼠血清的DMEM/F12培养基、无血清DMEM/F12培养基、含0.05%雷帕霉素的DMEM/F12培养基、含体积分数16%敷和备化方含药血清的DMEM/F12培养基培养。流式细胞术检测各组CD133+HepG2肝癌干细胞百分比；RT-PCR法检测各组细胞中PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平；Western blot法检测各组细胞中PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平；免疫荧光法检测各组细胞中LC3、LC3-Ⅱ的表达水平。结果与结论：(1)敷和备化方含药血清有抑制CD133+HepG2细胞增殖的作用，其中体积分数为16%敷和备化方含药血清干预72 h抑制作用最明显(P <0.05);(2)与血清对照组、空白对照组相比，敷和备化方组和雷帕霉素组CD133+HepG2细胞百分比下降(P <0.05),PI3K、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平均明显下调(P <0.05);PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平均明显下调(P <0.05);LC3、LC3-Ⅱ的荧光信号强度均明显下调(P<0.05);(3)与雷帕霉素组相比，敷和备化方组CD133+HepG2细胞中的PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均明显下调(P <0.05),PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平均明显下调(P <0.05),LC3、LC3-Ⅱ的荧光信号强度均明显下调(P <0.05);(4)结果表明，敷和备化方能抑制肝癌干细胞自噬和增殖，其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

• 单位
  深圳市宝安纯中医治疗医院; 广西中医药大学