猪CD8分子α链胞外区基因片段在毕赤酵母中的表达

作者：崔青; 王生富; 房永祥; 陈国华; 孙晓林; 景志忠

来源：中国兽医科学, 2010, (05): 465-469.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.05.017

• 猪CD8α分子
• 胞外区基因片段
• 真核表达
• 毕赤酵母 porcine CD8α
• gene fragment of extracellular domain
• eukaryotic expression
• Pichia pastoris

为了给猪CD8α分子单克隆抗体的研制提供高生物学活性的抗原,采用PCR方法从pGEM-T-pCD8α重组质粒中克隆了pCD8α分子的胞外区基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pCD8α-ED,在毕赤酵母中进行表达,并对重组基因工程菌的发酵时间、pH值进行了优化。结果表明,表达出约20ku的目的蛋白,诱导表达的最适pH值为5.0,诱导表达的最佳时间是120h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被鼠抗人CD8α多克隆抗体识别,在20ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有免疫活性结构。

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学