人骨形成蛋白2腺病毒表达载体转染体外培养兔腰椎间盘细胞的研究

作者：顾海伦; 吕刚; 刘莉; 李建军; 黄涛; 王佳

来源：中国修复重建外科杂志, 2006, 20(08): 820-824.

• 腺病毒
• 骨形成蛋白2
• 椎间盘细胞
• 基因转染

目的研究人骨形成蛋白2腺病毒表达载体(adenovirus-mediatedhumanbonemorphogeneticprotein2gene,Ad-hBMP-2)转染体外培养兔腰椎间盘细胞,分析其对腰椎间盘细胞的影响。方法成年健康新西兰大白兔4只,体重4～5kg,取L2、L3到L6、L7节段椎间盘细胞体外培养。利用免疫荧光和蛋白印迹法(Westernblot)检测空白对照组(未转染)、Ad-LacZ组[感染复数(multiplicityofinfection,MOI)150MOI]和不同剂量Ad-hBMP-2(50、100、150MOI)组转染后细胞hBMP-2的表达水平。采用RT-PCR检测转染后细胞型胶原和aggrecanmRNA表达水平。结果转染Ad-hBMP-2后通过免疫荧光和蛋白印迹法可见随转染剂量增加hBMP-2表达量逐渐增加,与50MOI组比较100MOI组升高102%,150MOI组升高183%。在转染后第6天RT-PCR结果显示转染组aggrecan和型胶原mRNA的表达高于对照组,并且随转染剂量增高mRNA的表达量均逐渐增加。aggrecanmRNA从50MOI组的61.7%增加到150MOI组的167.3%。型胶原mRNA从50MOI组的77.3%增加到150MOI组的169.0%。结论Ad-hBMP-2可高效转染体外培养兔腰椎间盘细胞,随转染剂量增加hBMP-2表达量逐渐增加,同时上调aggrecan和型胶原mRNA的表达,并存在剂量依赖关系。

• 单位
  中国医科大学; 公共卫生学院; 中国医科大学附属第一医院