抗SARS-CoV-2 IgG抗体第2代内控参考品的制备及其在ELISA检测方法中适用性的评价

作者：周志军; 彭焱; 岳胜兰; 陈丽梅; 罗娟; 冯璐; 纪德铭; 李璞; 邓琨; 李策生; 李陶敬^*; 胡勇^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(09): 1085-1092.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003992

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2灭活疫苗
• 内控参考品
• 酶联免疫试验
• 假病毒中和试验
• 中和抗体效价
• 相关性

目的 制备抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-Co V-2)IgG抗体第2代内控参考品(B2)，并评价其在ELISA检测方法中的适用性。方法 在接种北京生物制品研究所有限责任公司生产的SARS-Co V-2灭活疫苗(BBIBP-Cor V)志愿者中，初筛19份ELISA-IgG稀释倍数在20～60之间IgG抗体阳性的血浆，再采用ELISA法检测初筛血浆的IgG抗体、Ig M抗体及中和抗体，选取ELISA-IgG稀释倍数在32～45之间、Ig M阴性且中和抗体抑制率相近的非脂血血浆制备B2。用抗SARS-Co V-2免疫球蛋白第1代WHO国际标准品(NIBSC 20/136)标定第1代内控参考品(B1)、B2经ELISA法检测的中和抗体效价，并验证B2的加速稳定性(2～8℃分别放置5、8、14、20、30 d)、使用稳定性(18～25℃分别放置1、2、3 h)、冻融稳定性(1、2、3次)及长期稳定性(-25℃放置10个月)。以B2为标准品检测单份疫苗免疫后血浆，按照不同ELISA-IgG稀释倍数档位进行合并，制备不同档位的混合血浆，对混合血浆的ELISA-IgG稀释倍数与假病毒中和抗体效价进行相关性及线性回归分析。结果19份血浆中，ELISA-IgG稀释倍数在32～45之间、Ig M阴性且中和抗体抑制率接近的非脂血血浆共5份，每份血浆按等体积分数混合制备B2，其ELISA-IgG稀释倍数赋值为32。NIBSC 20/136标定的B1中和抗体效价为133.38 EIU/m L B2为122.14 EIU/m L。B2的加速稳定性、使用稳定性、冻融稳定性及长期稳定性回收率均在(100±15)%范围内。相同来源的混合血浆的ELISA-IgG稀释倍数与假病毒中和抗体效价均呈显著相关(R2均> 0.99,P均<0.000 1)。结论以SARS-Co V-2灭活疫苗免疫后血浆为原料制备的B2可替代用COVID-19康复者恢复期血浆为原料制备的B1。

• 单位
  成都蓉生药业有限责任公司; 国药集团武汉血液制品有限公司