β-catenin基因沉默对肝癌干细胞干性转录因子的影响

作者：孙华; 覃艳春; 荣震; 李祖隆; 蒋锐沅; 钟晓婷; 莫春梅^*

来源：中国组织工程研究, 2023, 27(15): 2297-2303.

• 肝癌干细胞
• 干细胞转录因子
• β-catenin
• RNA干扰
• CD133
• HepG2

背景：肝癌干细胞是导致癌细胞形成、更新和增殖的原因，寻找针对肝癌干细胞治疗的关键靶点，并进一步拓展肝癌综合治疗手段是重要研究课题。目的：观察β-catenin基因沉默后CD133+Hep G2细胞干性转录因子变化，探讨β-catenin调控肝癌干细胞干性的作用机制。方法：采用免疫磁珠筛选CD133+Hep G2细胞，然后经干细胞培养基诱导、扩增方案获得CD133+Hep G2肝癌干细胞，流式细胞术鉴定CD133+Hep G2细胞阳性率，RNA干扰技术构建沉默β-catenin基因表达的β-catenin-sh RNA慢病毒质粒，转染CD133+Hep G2肝癌干细胞72 h，荧光标记并评估转染效率。确认β-catenin沉默后，平板克隆形成实验观察CD133+Hep G2肝癌干细胞增殖情况，流式细胞术检测CD133+Hep G2肝癌干细胞的细胞周期，q RT-PCR和Western blot检测干性转录因子SOX2,NANOG,OCT4的m RNA及蛋白表达水平。结果与结论：与空白对照组和病毒空载组相比，病毒干扰组的细胞克隆形成能力明显降低，G0/G1期细胞百分比明显增多，S期和G2/M期细胞百分比降低，NANOG、SOX2、OCT4的蛋白和m RNA表达水平明显降低(P <0.05)，提示下调β-catenin表达可能对抑制肝癌干细胞的干性水平具有潜在作用。

• 单位
  广西中医药大学; 深圳市宝安纯中医治疗医院