结合LAMP-CRISPR/Cas12b与热敏感尿嘧啶DNA糖苷酶实现可消除残留污染的副溶血弧菌快速可视化检测（英文）

作者：吴芳; 卢辰; 胡文灏; 郭馨; 陈佳玥; 罗志丹^*

来源：Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology), 2023, 24(08): 749-763.

• 尿嘧啶糖苷酶
• 环介导等温扩增
• CRISPR/Cas12b
• 副溶血弧菌
• 一锅法检测关

<正>Vibrio parahaemolyticus is a major pathogen frequently found in seafood. Rapid and accurate detection of this pathogen is important for the control of bacterial foodborne diseases and to ensure food sa-fety. In this study, we established a one-pot system that combines uracil-DNA glycosylase(UDG), loopmediated isothermal amplification(LAMP), and clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein 12b(Cas12b) for detecting V. parahaemolyticus in seafood. This detection system can effectively perform identification using a single tube and avoid the risk of carryover contamination.作为海产品中的主要致病菌，副溶血弧菌的快速准确检测对于海水健康养殖和避免副溶血弧菌相关食源性疾病的发生至关重要。本研究结合尿嘧啶DNA糖苷酶（UDG)、环介导等温扩增（LAMP)和CRISPR/Cas12b技术，建立了海产品中副溶血弧菌的一锅法检测技术。该检测系统实现了一管化检测，并可避免残留污染的风险。我们通过优化dNTP混合物中dTTP/dUTP比例，并筛选出最优sgR NA。该方法在最优条件下，对副溶血弧菌纯培养物的检出限低至1×102 CFU/mL，在虾肉样品的检出限低至1×102 CFU/g。该方法对其他微生物病原体无交叉反应，且与荧光定量PCR结果符合率为100%。