葛根素对高糖环境下H_2O_2诱导人足细胞氧化应激及线粒体损伤的保护机制

作者：朱青青; 李雪玲; 严佳怡; 樊奕琛; 刘妮; 钟逸斐^*

来源：北京中医药, 2022, 41(02): 125-131.

DOI：10.16025/j.1674-1307.2022.02.004

• 葛根素
• 糖尿病性肾脏疾病
• 氧化应激
• 线粒体损伤

目的 探讨葛根素对高糖环境下H_2O_2诱导的人永生型足细胞氧化应激及线粒体损伤的影响及其作用机制。方法将足细胞分组给予高糖（30 mmol/L Glucose）及不同浓度H_2O_2刺激，同时加不同浓度葛根素干预48 h。分组如下：H0组（H_2O_20μmol/L）、H100组（H_2O_2100μmol/L）、H100+P3.3组（H_2O_2100μmol/L+葛根素3.3μmol/L）、H100+P10组（H_2O_2100μmol/L+葛根素10μmol/L）、H200组（H_2O_2200μmol/L）、H200+P3.3组（H_2O_2200μmol/L+葛根素3.3μmol/L）、H200+P10组（H_2O_2200μmol/L+葛根素10μmol/L）。CCK-8检测细胞存活率，Western blotting检测TOMM22的蛋白表达；提取基因组DNA,qPCR检测mtDNA的表达；提取RNA,qPCR检测TFAM、NRF1 mRNA表达；测定各组ATP水平、ROS水平，并评价各组足细胞线粒体呼吸功能。结果 与H0组相比，H100、H200组ROS水平升高（P<0.01）,H100、H100+P3.3组mtDNA拷贝数均减少（P<0.01）,TFAM mRNA表达降低，基础呼吸、质子渗漏、最大耗氧量、非线粒体氧消耗均升高（P<0.05）；与H100组相比，H100+P3.3组ROS减少（P<0.05）,TFAM mRNA、NRF1 mRNA表达均增加（P<0.05,P<0.01）,ATP生成增加（P<0.05），基础呼吸、质子渗漏均降低（P<0.05），而H100+P10组mtDNA拷贝数增加（P<0.05）,NRF1 mRNA、基础呼吸、质子渗漏、非线粒体消耗均升高（P<0.05）；与H100+P3.3组相比，H100+P10组mtDNA拷贝数明显增加（P<0.01），基础呼吸、质子渗漏、非线粒体氧消耗、ATP水平均升高（P<0.05）；与H200组相比，H200+P3.3、H200+P10组ROS水平明显降低（P<0.01）,H200+P10组NRF1 mRNA表达增加（P<0.01）、非线粒体氧消耗增加（P<0.05）；与H200+P3.3组相比，H200+P10组ROS水平增多（P<0.01）,TFAM mRNA表达增加（P<0.05）、NRF1 mRNA表达增加（P<0.01）。各组TOMM22蛋白表达、备用呼吸能力、耦合效率和备用呼吸率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 葛根素能部分缓解高糖及H_2O_2诱导的足细胞氧化应激及线粒体损伤。

• 单位
  上海中医药大学附属龙华医院