小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成

作者：梁霄; 罗小林; 钟华; 胡清华; 何芳

来源：生理学报, 2012, 64(03): 289-295.

DOI：10.13294/j.aps.2012.03.006

• 内皮细胞
• 钙敏感受体
• 钙信号
• NO
• siRNA

为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca~(2+)-sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells, HUVEC)介导钙内流和NO生成中的作用,本实验针对GenBank中人CaR的cDNA序列设计合成小干扰RNA(small interference RNA, siRNA),并将其转染入HUVEC中,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Western blot检测CaR蛋白表达及转染后的干扰效率,Fura-2/AM负载检测细胞内Ca~(2+)浓度(intracellular Ca~(2+)concentration, [Ca~(2+)]i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性。结果显示,实验成功将CaR siRNA转入HUVEC,Western blot 检测结果显示转染48 h后,CaR蛋白表达降低(P < 0.05);与未转染对照组和阴性对照组相比,在精胺 + Ca~(2+)刺激下,CaR siRNA转染组的[Ca~(2+)]i、eNOS活性和NO含量均显著降低(P < 0.05)。上述结果表明,CaR在精胺介导的HUVEC Ca~(2+)内流和NO生成中发挥重要作用。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 石河子大学