柱前衍生-高效液相色谱法测定重组Ⅲ型人源胶原蛋白修复凝胶中胶原蛋白

作者：张晓芸; 孙星宇; 杨政; 徐礼友; 谷琴; 王晓晨; 丁逸梅^*

来源：化学分析计量, 2023, 32(12): 84-89.

• 衍生化
• 重组Ⅲ型人源胶原蛋白
• 修复凝胶
• 脯氨酸

建立柱前衍生化高效液相色谱测定重组Ⅲ型人源胶原蛋白修复凝胶中胶原蛋白含量。将样品以6 mol/L盐酸溶液在110℃下加热水解24 h，采用12 mol/L氢氧化钠溶液中和，以2,4-二硝基氟苯(DNBF)为衍生化试剂，在弱碱性环境下，于60℃反应1 h，采用高效液相色谱法检测，色谱柱为Kromasil 100-5型C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)，柱温为30℃，流动相A相为0.05 mol/L乙酸铵溶液，B相为乙腈，梯度洗脱，流量为1.0 mL/min，进样体积为10μL，检测波长为360 nm。以脯氨酸为对照品，利用色谱峰面积外标法计算样品中脯氨酸的含量，再进行相对分子质量折算得到重组Ⅲ型人源胶原蛋白的含量。脯氨酸质量浓度在10～40μg/mL范围内线性相关系数为0.999 6，低、中、高三个浓度水平平均回收率分别为96.00%、96.05%、94.98%，相对标准偏差为2.29%(n=9)。脯氨酸对照品和样品的衍生化溶液于室温放置24 h均保持稳定。该方法具有测定结果准确、专属性强等优点，可应用于重组Ⅲ型人源胶原蛋白修复凝胶中胶原蛋白含量检测。

• 单位
  江苏省药物研究所; 南京工业大学