去卵巢大鼠血清来源外泌体促进原代成骨细胞的增殖

作者：高坤; 朱文秀; 李亨; 刘伟东; 李全; 余伟吉; 王立新; 曹亚飞^*

来源：中国组织工程研究, 2019, 23(07): 985-989.

DOI：10.3969/j.issn.2095-4344.1071

• 骨质疏松
• 外泌体
• 成骨细胞
• 血管内皮生长因子类
• 组织工程
• 血管内皮生长因子
• 组织构建

背景:骨代谢过程中,成骨细胞的数量和功能的变化影响骨的生物学特性,外泌体能够通过细胞间的传递进行信号传递,具有促进细胞增殖、分化的潜能。目的:探讨骨质疏松大鼠血清中外泌体的性质及其对成骨细胞的作用。方法:32只成年健康雌性SD大鼠,24 h新生SD大鼠若干只用于原代成骨细胞分离培养,实验动物由广东省医学动物实验中心提供。(1)建立去卵巢骨质疏松大鼠模型,以假手术组大鼠为对照组。通过ExoQuick提取对照组和骨质疏松大鼠血清中外泌体,用电镜、nanosight、Western blotting进行鉴定;(2)取对数期的原代成骨细胞接种于96孔细胞培养板中,接种浓度为2×104/孔。实验分为空白对照、外泌体对照组、骨质疏松外泌体组,分别加入DPBS、正常血清外泌体和骨质疏松血清外泌体,100μL/孔,CO2培养箱培育1d,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测成骨细胞的增殖;酶联免疫吸附试验法检测外泌体中血管内皮生长因子的浓度。结果与结论:(1)成功提取大小在100nm以下外泌体颗粒;(2)蛋白定量检测12周组外泌体蛋白质量浓度最高;不同时间点外泌体颗粒数12周组略高,但未见明显差异;(3)骨质疏松大鼠血清来源外泌体与空白对照组及正常外泌体组相比较,明显促进成骨细胞的增殖,且外泌体内血管内皮生长因子升高;(4)结果说明,骨质疏松大鼠血清中外泌体能够促进成骨细胞的增殖。

• 单位
  深圳市中医院; 北京中医药大学