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摘要
目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)对人膀胱癌细胞T24细胞增殖和凋亡的影响。方法利用荧光定量PCR检测人膀胱移行细胞癌细胞MGH-U1、T24、BIU-87以及EJ中TRPM8的表达水平;设计并合成靶向TRPM8的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染TRPM8表达最高的人膀胱癌细胞T24以构建稳定低表达TRPM8细胞株,通过免疫印迹法和荧光定量PCR来验证shRNA的干扰效率;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测干扰后细胞的增殖能力;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测PI3K、细胞周期素D1(Cyclin D1)以及Bcl-2的表达水平。结果 T24的TRPM8表达量在4株膀胱移行细胞癌细胞中最高;特异性靶向TRPM8的shRNA能够有效下调T24细胞中TRPM8的表达;特异性shRNA干扰组细胞较其他两组细胞增殖显著减慢(F=64.73,P<0.01);此外,干扰组的凋亡率显著高于空白组和对照组(F=84.73,P<0.01);最后,TRPM8干扰组细胞的PI3K、Cyclin D1以及Bcl-2蛋白的表达较空白组和对照组显著下调。结论采用RNA干扰技术能够有效沉默T24细胞的TRPM8基因,并致使其细胞增殖能力下降以及细胞凋亡率升高,其中可能的机制为通过调节细胞因子PI3K来调控人膀胱移行细胞癌细胞的增殖和凋亡。TRPM8在膀胱癌的发生发展中起着较为重要作用,TRPM8可能成为治疗膀胱癌的新靶点。
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单位浙江大学; 海盐县人民医院
