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摘要
目的 基于磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α(PGC-1α)信号通路探讨乌萸汤对初老小鼠卵母细胞的作用机制。方法 采用雄性6周龄SD大鼠制备乌萸汤含药血清；采用未成熟卵体外培养技术，原代细胞培养6周龄、24周龄小鼠卵母细胞后提取卵丘卵母细胞复合体(COC)。实验分为8组：对照组(6周龄小鼠COC培养于基础培养基)、初老组(24周龄小鼠COC培养于基础培养基)、初老+AICAR组(AMPK激动剂AICAR预处理24周龄小鼠COC 2 h)、初老+Compound C组(AMPK抑制剂Compound C预处理24周龄小鼠COC 2 h)、初老+乌萸汤含药血清组(24周龄小鼠COC培养于乌萸汤含药血清培养基)、初老+乌萸汤含药血清组+AICAR组(AMPK激动剂AICAR预处理24周龄小鼠COC 2 h后培养于乌萸汤含药血清培养基)、初老+乌萸汤含药血清组+Compound C组(AMPK抑制剂Compound C预处理24周龄小鼠COC 2 h后培养于乌萸汤含药血清培养基)、初老+山茱萸环烯醚萜苷类提取物组(24周龄小鼠COC培养于山茱萸环烯醚萜苷类提取物培养基)。采用PCR法及Western blot法检测各组卵母细胞中AMPK/PCG-1α通路相关因子基因及蛋白表达情况。结果 初老+AICAR组、初老+乌萸汤含药血清组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1基因相对表达量及AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、PGC-1α、Nrf1蛋白相对表达量和初老+乌萸汤含药血清+AICAR组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1基因相对表达量及AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、PGC-1α蛋白相对表达量均明显高于初老组(P均<0.05);初老+AICAR组、初老+乌萸汤含药血清组、初老+乌萸汤含药血清+AICAR组卵母细胞中Nrf2基因相对表达量及初老+Compound C组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1、Nrf2基因相对表达量均明显低于初老组(P均<0.05);初老+乌萸汤含药血清+Compound C组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1、Nrf2基因相对表达量及p-AMPKα(Thr172)、PGC-1α、Nrf1蛋白相对表达量均明显低于初老+乌萸汤含药血清组(P均<0.05)。结论 初老小鼠未成熟卵体外培养过程中，AMPK/PGC-1α通路可通过线粒体能量代谢从而影响卵母细胞质量；乌萸汤可通过AMPK/PGC-1α通路增强线粒体能量代谢及氧化应激状态，促进卵母细胞成熟，从而改善卵母细胞功能。
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单位北京中医药大学东方医院; 北京中医药大学
