人结肠癌细胞中抑制Akt活化下调c-FLIP基因的表达

作者：周晓东; 吕农华; 于红刚; 于皆平

来源：现代消化及介入诊疗, 2006, (03): 129-132.

• 结肠癌
• FLIP
• 蛋白激酶B

目的本实验旨在探讨结肠癌细胞中磷酸化蛋白激酶B(pAkt)对细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)基因表达的调控作用。方法取对数生长期的HT-29细胞系,分别采用10nM、20nM和40nM的Akt抑制剂wortmannin对其进行干预,收集不同干预时间点的细胞,运用MTT法检测细胞的增殖抑制情况。采用40nM的wortmannin干预HT-29细胞0、3、6、12、24h后分别收集等量细胞,提取细胞总蛋白及总RNA,采用Westernblot检测pAkt和c-FLIP蛋白表达水平,RT-PCR检测c-FLIP基因的转录水平。结果三个浓度的wortmannin都对HT-29细胞的生长具有抑制作用,随着浓度、时间的递增,其抑制效应逐渐增强(P<0.01或0.05),而对照组未见明显变化(P>0.05)。随着wortmannin的干预时间延长,磷酸化Akt蛋白的表达水平明显降低,同时c-FLIP蛋白的表达水平也随之下降,3h后其表达水平已明显降低。wortmannin干预HT-29细胞3h后,与对照组相比其c-FLIPmRNA表达水平已明显下降到40%,24h后其表达水平下降到25%。结论Akt活化的特异性抑制剂wortmannin可抑制体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长,结肠癌中可能存在Akt/c-FLIP信号通路调节c-FLIP基因的表达。

• 单位
  第一附属医院消化内科; 南昌大学; 武汉大学人民医院