人原发型肝癌组织cDNA文库的构建

作者：刘辉; 李钧; 张阳德; 周伟平; 李爱军; 潘泽亚; 傅思源; 陆炯炯; 邱应和; 吴东; 吴孟超

来源：中国现代医学杂志, 2007, (21): 2621-2624.

• cDNA文库
• 原发型肝癌
• 肿瘤抗原

目的快速构建混合人原发型肝癌组织cDNA文库。方法从混合人原发型肝癌组织分离总RNA,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第1链cDNA,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA,双链cDNA经sfiI(IA&IB)酶切,以CHROMA SPIN-400柱分级分离cD-NA,收集符合需要的cDNA片段并纯化,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库。结果经检测共获得3.96×106个重组子,重组率>93%,文库经扩增后滴度为3.92×109pfu/ml。结论用SMART方法构建的原发型肝癌组织cDNA文库质量较高,为以后筛选获取原发型肝癌特异抗原基因或其他相关基因奠定了基础。

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学; 中南大学湘雅医院