华泽兰根部乙酸乙酯萃取物基于NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路对NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞功能的影响

作者：杜冯; 邹坤; 黄文峰

来源：中华中医药学刊, 2023, 41(04): 144-289.

DOI：10.13193/j.issn.1673-7717.2023.04.029

• 华泽兰
• NIH-3T3细胞
• 细胞功能
• NF-κB
• 炎症小体

目的 探讨华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞（NIH-3T3）功能的影响。方法 从炎症因子一氧化氮（NO）及氧化应激重要因素活性氧（ROS）介入，通过核因子κB（NF-κB）及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLR-P3）炎症小体等信号通路角度阐明其作用机制。体外培养NIH-3T3细胞，分为空白对照组（Control）、不同浓度华泽兰根部乙酸乙酯萃取物组，检测不同浓度下华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对NIH-3T3细胞Toll增殖活性（MTT法）、细胞迁移（细胞划痕实验）、分泌NO及胞内ROS生成的影响，Western blot法检测其对Toll样受体4（TLR-4）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、NLR-P3、NF-κB、髓样分化因子（Myd88）、核因子抑制蛋白α（IκBα）、白细胞介素-18（IL-18）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、环氧化酶-2（COX-2）蛋白表达的影响。结果 细胞增殖与细胞划痕实验表明，华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对于NIH-3T3细胞的增殖与划痕愈合影响具有双向性。与对照组相比在低浓度下(-1)，萃取物有促进NIH-3T3细胞增殖与迁移的作用，而高浓度(>25μg·m L-1)反而表现出对NIH-3T3细胞的增殖与迁移抑制作用，且不同阶段呈现出相应的剂量依赖性，与对照组相比有统计学意义（P-1时，NO生成量相较于低浓度组差异有显著统计学意义（P12.5μg·m L-1)相较对照组差异无统计学意义（P>0.05）。细胞内ROS生成实验表明，经华泽兰根部乙酸乙酯萃取物处理后ROS生成量显著高于对照组（P-1时，细胞内NF-κB、TLR-4、Myd88、NLR-P3、ASC表达显著升高（P<0.01）,IκBα表达升高（P<0.05）,IL-18表达显著降低（P<0.01）,Caspase-3表达降低（P<0.05）。结论 华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞（NIH-3T3）增殖的影响具有双向性，即低浓度促进细胞增殖而高浓度抑制细胞增殖。其作用机制可能与NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路和细胞凋亡有关。

• 单位
  三峡大学; 国家中医药管理局