龙眼DlAGO4和DlAGO6启动子的克隆及活性分析

作者：陈荣珠; 赖钟雄^*

来源：福建农业学报, 2023, 38(05): 552-558.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2023.05.006

• 龙眼
• DlAGO4
• DlAGO6
• 启动子
• GUS活性

【目的】Argonaute(AGO)蛋白是RNA介导的沉默复合物RISC的核心成分，参与植物生长发育、组织形成、细胞增殖凋亡、病毒防御、逆境响应等多种生物过程。探究龙眼DlAGO4和DlAGO6基因启动子区域的顺式作用元件，以及重组表达载体在不同激素处理下的表达模式，可为进一步研究DlAGO4和DlAGO6基因的功能提供参考。【方法】使用常规PCR技术克隆龙眼DlAGO4和DlAGO6基因启动子序列，采用BPDG、PLACE和PlantCARE等生物信息学工具进行DlAGO4和DlAGO6基因启动子序列的生物信息学分析，并构建全长启动子与GUS基因融合表达载体，转化烟草叶片，进行瞬时表达，通过GUS组织化学染色分析启动子的活性。【结果】DlAGO4基因启动子片段长度1 514 bp,DlAGO6基因启动子片段长度1 784 bp。两个启动子序列均含有TATA-box和CAAT-box核心元件、茉莉酸甲酯、脱落酸和光响应元件；DlAGO4启动子序列还含有水杨酸、赤霉素响应元件和厌氧应答调控元件；DlAGO6启动子序列还含有生长素及昼夜节律调控元件。2个启动子片段均可驱动GUS基因表达，表达强度弱于CaMV35S。MeJA和ABA处理可显著提高转DlAGO6启动子烟草叶片中GUS基因的相对表达水平，SA和MeJA处理可提高转DlAGO4启动子烟草叶片GUS基因的相对表达水平。【结论】成功克隆了龙眼DlAGO4和DlAGO6基因启动子，二者为激素诱导型启动子，具有驱动下游GUS表达的活性，可能参与了植物体胚发育以及对激素的响应。

• 单位
  福建农林大学; 漳州卫生职业学院