鳖甲煎丸对AngⅡ-ROS诱导下HSC-LX2细胞中PKC-Pyk2/SRC通路的影响

作者：曹晓倩; 董文珠; 王璐; 陈杭萍; 姚立^*

来源：浙江中医药大学学报, 2019, 43(04): 297-304.

DOI：10.16466/j.issn1005-5509.2019.04.001

• 肝纤维化
• HSC-LX2
• AngⅡ
• ROS
• PKC
• Pyk2
• SRC
• 鳖甲煎丸

[目的]探讨鳖甲煎丸含药血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)作用下HSC-LX2细胞中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)-富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)/SRC通路的影响。[方法]以人源肝星状细胞HSC-LX2为研究对象,以AngⅡ诱导产生ROS,再以鳖甲煎丸含药血清进行干预,以MTT法检测HSC-LX2细胞的增殖情况,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS含量,Western blot检测PKC、Pyk2、SRC蛋白表达情况。[结果] MTT结果显示,与AngⅡ组比较,5%鳖甲煎丸含药血清培养24h后,鳖甲煎丸高、中剂量组显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P<0.05,P<0.01);培养48h后,鳖甲煎丸高、中、低剂量组均能显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P<0.05,P<0.05,P<0.01);培养72h后,中剂量组有显著抑制效果(P<0.01)。此外,除了15%中剂量鳖甲煎丸含药血清培养48h后有显著抑制效果(P<0.05),其余各组、各时间段均无明显抑制作用,差异无统计学意义(P>0.05)。荧光探针DCFH-DA结果显示,与空白对照组比较,AngⅡ组ROS产生明显增多,经鳖甲煎丸含药血清高、中剂量组干预后,ROS均不同程度减少。Western blot显示,鳖甲煎丸含药血清干预后,PKC(P<0.001,P<0.001,P<0.001)、Pyk2(P<0.05,P<0.001,P<0.001)、SRC(P<0.001,P<0.001,P<0.01)蛋白表达均受到显著抑制。[结论] HSC-LX2细胞经AngⅡ刺激后可以产生ROS,且细胞增殖明显,此过程与PKC、Pyk2、SRC蛋白的激活有关。鳖甲煎丸可通过减少ROS的产生来阻止HSC-LX2细胞的增殖,其机制与抑制PKC、Pyk2、SRC蛋白的表达有关。

• 单位
  浙江中医药大学