miRNA-373-3p靶向调控CD44表达对肾母细胞瘤细胞增殖的影响

作者：王艳君; 孔艳霞; 全雪丽; 原艳丽; 段勇涛; 王风; 王洁^*

来源：肿瘤研究与临床, 2022, 34(02): 86-91.

• Wilms瘤
• 微RNAs
• 抗原, CD44
• 细胞增殖

目的探讨miRNA-373-3p(miR-373-3p)靶向调控CD44表达对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响。方法利用生物信息学方法, 基于miRDB、miRanda、PITA以及DIANA-microT生物信息学数据库预测miR-373-3p可能的靶基因。取G401细胞, 分别转染miR-373-3p模拟物、模拟物阴性对照、miR-373-3p抑制剂、抑制剂阴性对照, 采用CCK-8法检测细胞增殖能力;采用克隆形成实验检测克隆形成的数目;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CD44 mRNA的相对表达量;蛋白质印迹法检测CD44蛋白的表达水平。利用HEK-293T细胞进行双荧光素酶报告基因实验验证miR-373-3p靶基因。结果生物信息学分析结果提示CD44是miR-373-3p的靶基因。自转染24 h起, miR-373-3p模拟物组G401细胞增殖能力较模拟物阴性对照组均下降(均P<0.05);自转染48 h起, miR-373-3p抑制剂组细胞增殖能力较抑制剂阴性对照组均增强(均P <0.05)。miR-373-3p模拟物组克隆形成数少于模拟物阴性对照组[(55.3±2.5)个比(90.7±2.9)个], 差异有统计学意义(t=14.57, P<0.01);miR-373-3p抑制剂组克隆形成数多于抑制剂阴性对照组[(115.0±2.7)个比(92.0±2.4)个], 差异有统计学意义(t=8.86, P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验显示, CD44是miR-373-3p的直接靶基因。miR-373-3p模拟物组、模拟物阴性对照组G401细胞中CD44 mRNA的相对表达量分别为0.62±0.03、1.00±0.01, 差异有统计学意义(t=11.28, P<0.01);miR-373-3p抑制剂组、抑制剂阴性对照组CD44 mRNA的相对表达量分别为1.31±0.02、1.00±0.00, 差异有统计学意义(t=12.65, P<0.01)。miR-373-3p模拟物组CD44蛋白表达降低, 而miR-373-3p抑制剂组CD44蛋白表达升高。结论在肾母细胞瘤中, miR-373-3p可以通过靶向调控CD44的表达抑制肿瘤细胞的增殖。

• 单位
  郑州大学