Flotillin-1缺失突变体基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定

作者：马俊俊; 刘永生; 丁耀忠; 周建华; 高宗良; 陈豪泰; 马丽娜; 张杰

来源：中国兽医科学, 2012, (11): 1168-1173.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2012.11.003

• 疯牛病
• Flotillin-1蛋白
• 酵母双杂交
• 诱饵载体
• 自激活作用 bovine spongiform encephalopathy
• Flotillin-1 protein
• yeast two-hybrid
• bait vector
• self-activation

为了筛选朊蛋白(PrP)与Flotillin-1蛋白相互作用的分子区域,采用RT-PCR方法从牛脑组织中扩增出Flotillin-1基因片段,应用酵母双杂交技术构建Flotillin-1各缺失突变体的诱饵质粒载体pGBKT7-X,进行了酶切鉴定及序列分析,并验证了诱饵质粒载体对酵母细胞的自激活作用和毒性。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-X,部分诱饵载体对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性;部分诱饵载体对报告基因有自激活作用,对酵母细胞无毒性。证明,部分重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统寻找与PrP蛋白相互作用的分子区域。

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所