液相色谱-串联质谱法检测肝癌细胞N6-甲基腺嘌呤核苷甲基化水平

作者：李盛建; 王慧; 吕磊; 李群英; 须秋萍; 周艳卿; 张国庆; 赵亮^*

来源：现代检验医学杂志, 2020, 35(01): 20-24.

• 液相色谱-串联质谱
• 6-甲基腺嘌呤核苷甲基化" name="keyword">N6-甲基腺嘌呤核苷甲基化
• 肝癌细胞

目的建立同时测定N6-甲基腺嘌呤核苷(m6A)和腺嘌呤核苷(A)的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),检测肝癌细胞m6A甲基化水平。方法Hep G2和L02细胞mRNA经分离、消化为核苷,再经含对乙酰氨基酚为内标的甲醇沉淀处理。色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C18柱,流动相为0.1 g/dl甲酸水-甲醇(82∶18),流速0.4 ml/min,柱温为30℃。质谱检测模式为多反应监测(DMRM)模式,测定m6A和A的浓度,计算细胞m6A甲基化水平。结果建立的LC-MS/MS法检测m6A和A的浓度分别在0.15～50.00 ng/ml和1.50～500.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r>0.999),日内、日间精密度均小于15.00%,准确度为93.67%～101.10%,回收率为91.46%～97.60%,基质效应为90.26%～99.27%,样品稳定性良好。HepG2和L02细胞m6A甲基化水平分别为(0.73±0.11)%和(1.26±0.22)%。结论该方法准确、快速、稳定和灵敏,可用于检测肝癌细胞m6A甲基化水平。

• 单位
  上海东方肝胆外科医院