人EPO基因重组腺病毒载体的构建及表达

作者：陈邦党; 马依彤; 马翔; 杨毅宁; 刘芬

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2010, (03): 223-226.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005399

• 人促红细胞生成素
• 同源重组
• 表达
• 重组腺病毒 human erythropoietin
• homologous recombination
• expression
• recombinant adenovirus

目的:制备表达人促红细胞生成素基因(hEPO)的重组腺病毒。方法:将hEPO基因亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带hEPO基因的重组腺病毒载体。获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装、扩增出重组腺病毒,氯化铯梯度离心法进行纯化,PCR和电镜负染鉴定重组腺病毒,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并检测重组腺病毒的滴度。继而用纯化的重组腺病毒感染HeLa细胞,测定转染效率,以Western blot检测hEPO蛋白的表达。结果:成功构建了携带hEPO基因的重组腺病毒载体pAd-hEPO,PCR、透射电镜和绿色荧光鉴定证实病毒...

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院