温郁金ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

作者：汤晓闯; 王晓慧; 梁广; 姜程曦; 肖健; 李校堃

来源：安徽农业科学, 2008, (22): 9413-9415.

DOI：10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.22.067

• 郁金
• 体系优化
• ISSR-PCR Curcuma wenyujin
• System optimization
• ISSR-PCR

[目的]寻找一个可用于温郁金ISSR-PCR的最适宜反应体系。[方法]利用CTAB法提取基因组DNA,同时利用PCR扩增技术和方法,对引物、模板DNA、Mg2+d、NTP、Taq聚合酶等反应条件进行优化。[结果]反应体系的最佳条件是总体积为25μl,其中Mg2+浓度(25mmol/L)2.2μl,Taq聚合酶(5 U/μl)0.4μl,引物浓度(20μmol/L)1.5μl,模板DNA(5 ng/μl)1.5μl,dNTP(2.5 mmol/L)2.2μl,10×PCRbuffer2.5μl;PCR扩增程序为:1个循环的94℃预变性5 min;94℃变性35 s,相对应的引物退火温度退火1 m...

• 单位
  温州医学院