脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1在氧化应激介导大鼠肺微血管内皮细胞损伤中的调控作用

作者：翁杰; 侯金珍; 汤鲁明; 谢慧; 陈大庆; 孙来芳; 应斌宇; 龚裕强

来源：中华危重症医学杂志(电子版), 2016, 9(05): 309-314.

• 过氧化氢
• 氧化性应激
• 活性氧类
• 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1
• 肺微血管内皮细胞

目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)在过氧化氢(H2O2)介导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)氧化应激中的调控作用。方法分离培养大鼠PMVECs并分成4组:对照组(未加H2O2)及各剂量H2O2组(终浓度分别为50、100、200μmol/L的H2O2)。在H2O2刺激细胞24 h后检测细胞增殖活性、细胞内活性氧水平及APE1蛋白表达,同时检测100μmol/ml的H2O2刺激细胞24、48、72 h后APE1蛋白表达并比较。另外利用慢病毒载体转染构建APE1过表达PMVECs,将其分成对照组(未加H2O2),H2O2组(终浓度为100μmol/L的H2O2),H2O2+空载体转染组(100μmol/L的H2O2刺激慢病毒空载体转染的细胞)及H2O2+APE1转染组(终浓度为100μmol/L的H2O2刺激APE1过表达细胞),并在24 h检测细胞活性氧水平及细胞增值情况。结果不同剂量组H2O2刺激细胞24 h后,四组间细胞增殖活性、活性氧的水平和APE1蛋白表达相对值差异均有统计学意义(F=80.238、445.608、547.566,P均<0.001)。在100μmol/L的H2O2刺激细胞0、24、48和72 h后,APE1蛋白表达相对值的比较有统计学意义(F=422.324,P<0.001),且随时间增加APE1表达也逐渐下降[(0.781±0.043)、(0.611±0.026)、(0.407±0.014)、(0.272±0.013),P均<0.05]。在转染慢病毒载体后,H2O2组活性氧水平明显高于对照组[(86.4±1.2)vs.(56.4±0.9),P<0.05];而H2O2+APE1转染组细胞活性氧水平较H2O2组显著下降[(66.8±1.0)vs.(86.4±1.2),P<0.05],细胞增殖活性明显增加[(0.209±0.001)vs.(0.153±0.001),P<0.05]。结论 H2O2刺激可导致APE1蛋白表达下降,而上调APE1表达可增加细胞增殖活性,并抑制活性氧的产生。因此,APE1可能具有减轻H2O2介导的大鼠PMVECs氧化应激反应的作用。

• 单位
  温州医科大学附属第二医院