黄芪甲苷抑制COUP-TFII表达对成骨细胞分化的影响及相关分子机制研究

作者：赵华桥; 朱红; 王家洪; 卿泉; 那江; 李斌; 杨东

来源：四川中医, 2018, 36(05): 54-58.

• 黄芪甲苷
• 鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ
• 慢病毒载体
• shRNA
• 成骨细胞分化

目的:探究黄芪甲苷对小鼠成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞分化的影响及相关分子机制。方法:取小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1经复苏后进行培养,再以成骨细胞分化培养基诱导分化后,应用倒置显微镜、茜素红染色等方法鉴定成骨细胞分化;取对数生长期的MC3T3-E1细胞,构建shRNA COUP-TFII的质粒载体,以慢病毒载体成功转染至MC3T3-E1的细胞,作为阳性对照组;取正常对数生长期细胞根据培养基中所加黄芪甲苷的浓度分为:空白对照组(0μg/ml)、黄芪甲苷低剂量组(25μg/ml)、中剂量组(50μg/ml)、高剂量组(100μg/ml);采用ALP活性检测和钙结节染色法评估黄芪甲苷对成骨细胞分化能力的影响;以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法测定黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞中COUP-TFII基因及蛋白表达的影响。结果:MC3T3-E1细胞培养18天后,细胞重叠生长,经茜红素染色可见大小形态不一的钙结节沉积;阳性对照组及黄芪甲苷处理组MC3T3-E1细胞中ALP活性及钙化结节程度均显著高于空白对照组,黄芪甲苷处理组间对比差异有统计学意义(P<0.05),阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组无显著性差异(P>0.05);阳性对照组及黄芪甲苷处理组COUP-TFII基因及蛋白表达水平均显著低于空白对照组(P<0.05),黄芪甲苷处理组间对比差异有统计学意义(P<0.05),阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组无显著性差异(P>0.05)。结论:黄芪甲苷能够通过抑制COUP-TFII表达,促进成骨细胞的分化。