金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素A的原核表达

作者：王毅; 肖异珠; 杨致邦; 欧阳莹; 李咏梅; 罗晓燕

来源：重庆医科大学学报, 2015, 40(03): 436-440.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.000441

• 金黄色葡萄球菌
• 葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征
• 表皮剥脱毒素A
• 原核表达

目的:通过基因工程技术获取重组表皮剥脱毒素A(recombine exfoliative toxin A,r ETA),为深入研究表皮剥脱毒素的致病机制提供实验材料。方法:根据Gen Bank公布的ETA基因序列设计引物,从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)基因组中扩增ETA基因,插入原核表达载体p QE30,构建重组质粒p QE30-ETA。将p QE30-ETA转化表达菌E.coli M15,优化诱导表达条件,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot鉴定。重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后,注入BALB/C小鼠皮下,观察皮肤病理改变,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果:重组质粒p QE30-ETA序列分析显示插入的基因片段全长927 bp,与基因文库中的ETA序列完全吻合。SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子量约为27 k D,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间4 h,可得到最大表达量的可溶性蛋白,约为20%。Western blot显示与S.aureus产生的ETA蛋白在同一位置,重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后蛋白纯度达90%以上,注射重组蛋白的小鼠表皮内出现水疱和裂隙。结论:成功构建了重组质粒p QE30-ETA,表达了具有生物学活性的重组S.aureus表皮剥脱毒素A。

• 单位
  重庆医科大学; 基础医学院; 重庆医科大学附属儿童医院