人乳头瘤病毒11型E7蛋白基因重组腺病毒载体的构建及表达

作者：王飞; 毕志刚; 李光富; 吴海玮; 王群; 刘丰; 王新军; 张兆松

来源：中华皮肤科杂志, 2005, (05): 276-278.

• 尖锐湿疣
• 乳头状瘤病毒,人
• 基因病毒
• 遗传载体
• 基因表达

目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)E7蛋白基因腺病毒载体,并在真核细胞表达。方法用PCR法,扩增出HPV11E7基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体形成重组质粒TOPO-E7。TOPO-E7与腺病毒载体pAD/CMV/V5-DESTTM重组反应,E7基因被重组到腺病毒载体上。该载体经PacI酶切,脂质体法转染人胚肾293A细胞,获得重组腺病毒载体pAD-E7。pAD-E7转染人HaCaT细胞,激光共聚焦显微镜分析E7蛋白表达情况。结果经酶切及序列分析鉴定,重组质粒TOPO-E7成功构建。重组子pAD-E7转染293A细胞后,获得滴度为1.4×107pfu/mL的重组腺病毒载体。该载体转染HaCaT细胞,48h后激光共聚焦显微镜下可见细胞内E7蛋白表达。结论重组腺病毒载体能有效介导HPV11E7基因在真核细胞的表达。

• 单位
  广东省人民医院; 南京医科大学第一附属医院; 南京医科大学