乙型肝炎病毒核酸实时荧光PCR超敏检测方法的建立与评价

作者：夏乔; 廖丽丽; 董志强; 杨鸿辉; 蒋析文^*

来源：分子诊断与治疗杂志, 2019, 11(05): 348-378.

• HBV DNA
• Taq-man
• 实时荧光PCR
• 相关性

目的应用Taq-man实时荧光PCR技术,建立一种超敏检测乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)载量的方法(以下简称超敏试剂),并对其临床应用进行评价。方法对比GeneBank中HBV DNA基因组序列,使用Primer 5.0软件在其S区和C区分别设计一对特异性的引物和探针,应用Taq-man探针技术,优化反应体系和反应条件。并收集195例临床样本与某国产试剂进行平行检测,采用相关性分析和Bland-Altman等方法对检测结果进行分析。结果建立的HBV DNA超敏检测方法灵敏度达10 IU/mL,线性范围20～1×109IU/mL,准确性为100%,覆盖型别为A、B、C、D、E、F、H,批内和批间变异系数在5%以内。195例临床样本检测结果显示,与某国产试剂相比,超敏试剂的阳性符合率为99.45%,阴性符合率为91.67%,总符合率为98.97%(Kappa值为0.911 2,P<0.05)。超敏试剂与某国产试剂具有很强的相关性(r=0.979 1,P<0.000 1)。结论本研究成功建立了一种HBV DNA实时荧光PCR检测方法,具有很高的临床应用价值。

• 单位
  中山大学达安基因股份有限公司