pCMV-HSF2-FLAG重组质粒的构建及其在Caco-2细胞中的表达

作者：缪应雷; 牛俊坤; 周丽峰; 童明霞

来源：世界华人消化杂志, 2012, (26): 2453-2459.

• 热休克转录因子2
• 基因重组
• 真核表达
• Caco-2
• 溃疡性结肠炎 Heat shock factor 2
• Gene recombination
• Eukaryotic expression
• Caco-2
• Ulcerative colitis

目的:构建人HSF2 pCMV-Myc真核表达载体,研究其在人结肠上皮肿瘤细胞Caco-2内的表达和定位.方法:以HSF2 Human cDNA ORF clone为模板,PCR法扩增出全长HSF2编码系列,用EcoRⅠ和KpnⅠ对HSF2 PCR纯化产物双酶切后,采用基因重组技术将其插入至pCMV-Myc载体中.DNA测序正确后,脂质体法将重组质粒转染到Caco-2细胞内,提取细胞总RNA逆转录为cDNA后进行普通PCR检测HSF2 mRNA转录水平,提取细胞蛋白进行Western blot检测HSF2蛋白质水平及融合蛋白表达.采用激光共聚焦显微镜观察HSF2及融合蛋白在Caco-2内的表达...

• 单位
  昆明医科大学; 南充市中心医院