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摘要
目的 联合液相-质谱（liquid-mass spectrometry,LC-MS）分析和网络药理学方法探究由清热活血方防治动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的潜在靶点。方法 首先，采用LC-MS定性分析对清热活血方化学成分进行鉴定，并将得到的成分输入Swiss Target Prediction数据库进行目标靶点预测，并采用Cytoscape 3.7.1构建清热活血方活性成分-核心靶点网络；其次，从疾病数据库中收集AS相关靶点；将AS相关靶点与清热活血方靶点取交集，得到清热活血方抗AS靶点，并制作靶标蛋白相互作用网，然后进行GO（Gene Ontology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）富集分析。之后，随机将50只雄性ApoE-/-小鼠分为空白组、模型组、清热活血方低、中、高剂量组，并通过高脂饮食的方式建立ApoE-/-小鼠AS模型，清热活血方组给予低、中、高剂量药物干预，16周末取主动脉组织，对筛选出的通路进行基因和蛋白水平的验证。最后，将LC-MS定量分析筛选出含量最高的两个成分，与筛选出的通路基因进行分子对接，将靶基因进行二次筛选。结果 LC-MS分析清热活血方共筛选出中68个活性成分，对应靶标223个；通过检索疾病数据库，去除重复后共得到与AS相关疾病靶点3291个；将清热活血方对应靶标与AS靶点取交集得到136个核心基因。GO富集分析结果显示包含炎症反应的调控、膜微域和配体-激活转录因子活性等的参与；KEGG通路富集分析结果显示涉及PI3K/Akt等47条清热活血方抗AS信号通路。WB和RT-qPCR结果提示，清热活血方可以下调p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt水平，且可下调PI3K/Akt通路的13个基因表达水平。LC-MS定量分析得出黄芩苷和丹酚酸B是含量最多的两个成分，与PI3K/Akt通路上的13个基因进行分子对接，结果提示RXRA基因与黄芩苷和丹酚酸B自由结合能最低。结论 清热活血方可能通过介导RXRA基因调控PI3K/Akt信号通路实现抗AS作用，本研究为清热活血方干预AS提供新思路和新靶点。
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