CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

作者：李翊泉; 黄伟青; 徐韫健; 张志强; 张东梅; 江洁华

来源：中国微生态学杂志, 2012, (07): 597-601.

DOI：10.13381/j.cnki.cjm.2012.07.015

• 肺炎克雷伯菌
• CTX-M-3
• 原核表达
• 纯化
• 多克隆抗体 Klebsiella pneumonia
• CTX-M-3
• Prokaryotic expression
• Purification
• Polyclonal antibody

目的将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备。方法将保存的重组质粒pET-28a( )/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中原核表达。IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表达,利用镍琼脂糖凝胶亲和柱层析纯化蛋白,用纯化的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果可溶性检测表明表达产物以可溶性形式(上清中)和包涵体形式(沉淀中)两种形式存在。通过蛋白表达条件的优化实验,SDS-PAGE电泳结果显示18℃,0.8 mmol/L IPTG诱导24 h的CTX...

• 单位
  中山大学附属第一医院; 广州医科大学