NLS-RARα通过与importin α1/β1(KPNA2/KPNB1)结合入核并抑制U937细胞分化

作者：叶娇; 刘北忠; 李健; 熊玲; 余莉华; 但文冉; 刘冬冬; 姚娟娟; 袁桢; 钟鹏强; 刘俊梅; 钟梁^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2020, 36(06): 499-506.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008983

• 核定位信号
• 维甲酸受体α(RARα)
• 细胞分化
• 核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importinα1)
• 核转运蛋白β1/输入蛋白β1(KPNB1/importinβ1)

目的探究核定位信号-维甲酸受体α(NLS-RARα)异常的核定位对细胞分化的抑制作用以及其核转运机制。方法过表达带有血凝素(HA)标签的NLS-RARα慢病毒和空载体慢病毒转染HEK293T细胞和U937细胞,设为NLS-RARα过表达组(NR组)和阴性对照组(NC组)。提取HEK293T细胞与U937细胞NC组和NR组细胞核和细胞质蛋白,Western blot法检测NLS-RARα的定位。同时采用免疫荧光细胞化学染色检测NLS-RARα的定位情况。1α,25-二羟维生素D3(1,25D3)诱导U937细胞分化,实时定量PCR,Western blot法检测细胞CD11b、 CCAAT/增强子结合蛋白β(CEBPβ)在mRNA和蛋白水平,采用质谱和免疫共沉淀技术(CoIP)筛选与NLS-RARα相作用的转运蛋白,并且通过小干扰RNA(siRNA)转染验证其对NLS-RARα的核定位作用。结果 NLS-RARα主要位于细胞核中。与对照组相比,过表达NLS-RARα组CD11b和CEBPβ的增加减少,说明NLS-RARα对1,25D3诱导的细胞分化有抑制作用。质谱和CoIP结果发现核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importinα1)和核转运蛋白β1/输入蛋白β1(KPNB1/importinβ1)与NLS-RARα有相互作用,敲低KPNA2/KPNB1则抑制NLS-RARα入核。结论 NLS-RARα通过结合KPNA2/KPNB1入核,抑制U937细胞分化。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属永川医院; 中心实验室