经圆窗膜鼓阶显微注射腺相关病毒转染小鼠耳蜗的研究

作者：陈嘉伟; 王卫龙; 丁雪瑞; 赵倩倩; 安晓刚; 王人凤; 卢连军^*

来源：听力学及言语疾病杂志, 2019, 27(03): 301-305.

• 基因转染
• 圆窗膜
• 腺相关病毒
• 小鼠
• 绿色荧光蛋白

目的探讨经圆窗膜鼓阶显微注射携带绿色荧光蛋白基因的重组腺相关病毒AAV2/9-GFP转染小鼠耳蜗的可行性,为应用腺相关病毒治疗遗传性聋提供实验基础。方法将24只野生型C57BL/6J小鼠随机分为三组:实验组(12只)和人工外淋巴液组(6只)分别经耳后径路通过圆窗膜向鼓阶内注射2μl AAV2/9-GFP或人工外淋巴液;空白对照组(6只)正常饲养,不做任何处理。于术后21 d进行ABR测试,之后取耳蜗基底膜行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察。结果术后实验组和人工外淋巴液组术侧耳ABR各频率反应阈均不同程度升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),实验组与人工外淋巴液组比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组转染AAV2/9-GFP后可见基底膜底回至顶回均有GFP表达,转染阳性细胞呈逐渐减少的趋势,底回、中回及顶回的内毛细胞平均转染效率分别为82.7%、75.0%、44.7%,底回与顶回、中回与顶回转染效率比较差异均有统计学意义(P<0.05),底回与中回比较差异无统计学意义(P>0.05)。AAV2/9-GFP主要转染内毛细胞,外毛细胞未见GFP表达;实验组对侧耳、人工外淋巴液组及空白对照组均未见GFP表达。结论携带目的基因的腺相关病毒载体可通过经圆窗膜鼓阶显微注射的方法转染至小鼠耳蜗内毛细胞并表达。

• 单位
  唐都医院; 中国人民解放军空军军医大学; 西京医院