IL-35对慢加急性肝衰竭患者外周血CD8+ T淋巴细胞功能的影响

作者：高艺; 梁志军; 符健^*

来源：临床肝胆病杂志, 2019, 35(09): 2011-2016.

DOI：10.3969/j.issn.1001-5256.2019.09.025

• 慢加急性肝功能衰竭
• 白细胞介素35
• CD8阳性T淋巴细胞

目的观察慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清IL-35表达水平,评估IL-35对ACLF患者CD8+T淋巴细胞功能的影响。方法纳入2018年11月-2019年4月在海南省人民医院就诊的ACLF患者28例和健康对照者14例,采用ELISA法检测血清IL-35水平。分选外周血CD8+T淋巴细胞,使用重组人IL-35刺激培养,应用实时定量PCR法检测CD8+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA水平,流式细胞术检测CD8+T淋巴细胞中程序性死亡分子-1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达。应用直接接触和间接接触共培养系统将HLA-A2限制性CD8+T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,加入重组人IL-35后通过检测靶细胞死亡比率和细胞因子分泌评估CD8+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。符合正态分布的计量资料2组间比较采用两独立样本t检验或配对t检验;不符合正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验;相关性分析采用Spearman秩相关分析。结果 ACLF患者血清IL-35水平[72. 32(54. 04～111. 30) pg/ml]较健康对照者[46. 00(27. 02～82. 29) pg/ml]显著升高(Z=2. 184,P=0. 020)。ACLF患者存在CD8+T淋巴细胞功能耗竭,主要表现为CD8+T淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量降低、PD-1和CTLA-4阳性细胞比例升高、细胞杀伤(诱导靶细胞死亡)和非细胞杀伤功能(分泌IFNγ)下降(P值均<0. 05)。使用重组IL-35刺激后,ACLF患者和健康对照者CD8+T淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA的相对表达量均显著降低,PD-1和CTLA-4的比例则显著升高,CD8+T淋巴细胞的直接细胞杀伤功能均显著降低(P值均<0. 05)。结论升高表达的IL-35抑制ACLF患者CD8+T淋巴细胞的直接细胞杀伤功能,提示IL-35在ACLF中可能诱导细胞免疫功能耗竭。

• 单位
  博鳌超级医院; 海南省人民医院