以高热稳定性的腺苷酸基琥珀酸合成酶为催化剂大量合成腺苷酸基琥珀酸(盐)

作者：王楠; 姜允嘉; 王洋; 赵晓宏; 郭鹏; 蔡大勇; 谢勇^*

来源：中国医药生物技术, 2019, 14(02): 108-114.

• 腺苷酸基琥珀酸(盐)
• 腺苷酸基琥珀酸合酶
• 古细菌Pyrococcus horikoshii OT3

目的实现腺苷酸基琥珀酸(盐)(S-AMP)的大规模合成,为开展药物学等研究提供原料。方法以pET-28-a为表达载体,利用大肠杆菌表达古细菌Pyrococcus horikoshii OT3来源的腺苷酸基琥珀酸合成酶(PhAdSS),利用Ni-NTA层析柱纯化后作为催化剂在实验室内开展这种微生物体内合成S-AMP的反应。用Bradford法测定纯化后PhAdSS的浓度。利用硅胶薄层层析检测反应进度。用硅胶柱层析法和重结晶法纯化S-AMP,利用质谱法测定合成品中S-AMP的分子量,利用紫外分光光度法测定合成品内S-AMP的含量及回收率。结果经纯化后从1 L的自动诱导培养基中至少获得20 mg的His-tagged-PhAdSS。将含有10 mmol/L肌苷酸、11 mmol/L L-天冬氨酸、20 mmol/L鸟苷三磷酸、4 mmol/L MgCl2、2.9μmol/L的His-tagged-PhAdSS溶液于常压环境中,70℃恒温6 h以上可以实现IMP完全转化为S-AMP。纯化后可得到S-AMP的单晶体,利用紫外分光光度法测定的纯度为94%,收率为17%。结论实现了PhAdSS为催化剂的S-AMP的大量合成。

• 单位
  中国医学科学院药用植物研究所; 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室