重组可溶表达结核分枝杆菌新基因编码蛋白Rv2742的相互作用蛋白质组研究

作者：王红; 万李; 武舒佳; 常蕾; 万康林; 张瑶^*; 徐平^*; 戴二黑^*

来源：军事医学, 2019, 43(10): 747-754.

• 结核分枝杆菌
• 新编码基因
• Rv2742
• 蛋白质组
• 质粒
• 相互作用蛋白质
• MBP pull-down

目的 Rv2742是基于蛋白质基因组学技术从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Rv,结核菌)中发现并验证的遗漏注释基因。该研究旨在筛选Rv2742在结核菌中的相互作用蛋白质,对Rv2742互作网络进行分析,为深入探索其在结核菌中所参与的生物学功能提供理论基础。方法采用免疫亲和纯化质谱(IP-MS)筛选Rv2742在结核菌中的互作蛋白质。以pMAL-c2X和pMAL-c2X-Rv2742载体诱导表达、纯化获得的麦芽糖结合蛋白(MBP)和MBP-Rv2742融合蛋白为诱饵,分别取等摩尔蛋白与H37Rv非变性全细胞蛋白质裂解物进行孵育,收集2次生物学重复实验得到的与MBP和MBP-Rv2742诱饵结合的蛋白质复合物,10%SDS-PAGE凝胶电泳验证,通过液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析、筛选出Rv2742在结核菌中的互作蛋白质,对筛选到的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)和互作网络分析。结果共筛选到105个Rv2742的潜在互作蛋白质,其定位主要分布在细胞壁、细胞质膜和细胞外区域等细胞组分中,功能上主要参与低氧应激、宿主共生、运输、毒力因子分泌等生物学过程。结论结核菌中有105个蛋白质与Rv2742互作,生物学功能及互作网络分析发现Rv2742可能参与结核菌侵入人体后的致病过程。

• 单位
  蛋白质组学国家重点实验室; 传染病预防控制国家重点实验室; 公共卫生学院; 基础医学院; 中国医学科学院; 武汉大学; 石家庄市第五医院; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 华北理工大学; 北京蛋白质组研究中心