别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

作者：王彤彤; 叶鑫; 边维; 陈治池; 杜娟娟; 傅维达; 陈梦娇; 李俊楠; 孙臣友^*

来源：解剖学报, 2021, 52(01): 5-13.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2021.01.001

• 别孕烯醇酮
• γ-氨基丁酸A受体
• 多巴胺能神经元
• 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ
• 脑源性神经营养因子
• 免疫印迹法

目的明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制。方法向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平(nifedipine),采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的变化,Western blotting检测胞质钙调蛋白(CaM)、钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ3(Ca MKⅡδ3),胞核Ca MKⅡδ3、脑源性神经营养因子(BDNF)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)表达的变化,采用蛋白质免疫共沉淀验证Ca MKⅡδ3与CDK1/BDNF的相互作用。结果 APα作用后,6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数目均明显增加,而TH/Brd U双阳性细胞数目无显著变化;同时Western blotting结果表明,SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯6-OHDA组相比也明显上升,经Bic处理后各蛋白增加更为明显。免疫共沉淀结果表明,Ca MKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用。结论 APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中,GABAAR发挥负性调控作用,通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的,其中Ca2+-Ca M-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用。

• 单位
  温州医科大学; 解剖学教研室; 台州职业技术学院; 第一临床医学院; 基础医学院