Micro-RNA与Notch信号调控肺炎克雷伯菌感染肺泡上皮细胞自噬的作用研究

作者：师志云; 尹晓丽; 侯晓慧; 王良方; 张玉英; 李刚; 王文; 陶佳; 李莎莎; 贾伟^*

来源：中国病原生物学杂志, 2021, 16(12): 1393-1403.

DOI：10.13350/j.cjpb.211207

• 肺炎克雷伯菌
• 肺泡Ⅱ型上皮细胞
• 自噬
• Micro-RNA
• Notch信号

目的 探讨Micro-RNA与Notch信号调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬在肺炎克雷伯菌感染的作用机制。方法 构建体外肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞(ACEII)A549细胞模型，荧光定量PCR筛选表达变化显著的micro-RNAs;在感染0、24、48、72 h用自噬抑制剂(3-MA)和自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)分别作用于A549细胞，荧光定量PCR检测micro-RNA表达的动态变化。构建A549细胞miR-144 mimics转染模型，Western blot检测Notch1的蛋白表达，显微镜观察菌落变化情况。结果 与Control组相比，KPN组细胞中miR-125a、miR-144、miR-155、miR-146a、miR-9的表达水平均显著升高(均P<0.05),其中以miR-144尤为显著。随着培养时间延长，KPN组细胞中miR-144的表达水平逐渐降低；相比KPN组，KPN+3-MA组细胞中miR-144的表达水平降低更显著。成功构建miR-144 mimics转染细胞模型，与Control组相比，KPN组细胞中Notch1的蛋白表达水平显著升高(P<0.05);转染miR-144 mimics后，Notch1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05);A549细胞在转染miR-144 mimics后感染KPN,Notch1蛋白表达水平相比KPN组显著降低(P<0.05)。菌落计数显示，24 h开始KPN+miR-144 mimics组菌落数显著高于KPN组(P<0.05),两组的菌落数均随着时间延长而增多。结论 micro-RNA和Notch信号在调控肺炎克雷伯菌感染肺泡II型上皮细胞发生细胞自噬中发挥重要作用。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏临床病原微生物重点实验室; 宁夏医科大学