鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因密码子优化及异源表达纯化

作者：郭一星; 杨银龙; 马玥; 岳盈盈; 宋楠楠; 王玮玮; 贾海红; 李翠玲^*; 李冰清^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(09): 1058-1080.

DOI：10.13350/j.cjpb.190915

• 鼠疫耶尔森菌
• YopJ蛋白
• 基因密码子优化
• 异源表达

目的优化鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白基因密码子并在大肠埃希菌中进行异源表达纯化。方法依据大肠埃希菌密码子偏好性对鼠疫耶尔森菌YopJ基因进行全基因序列优化,并设计引物。分别以密码子优化前后的鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因为模板,将包含YopJ(22aa-288aa)和YopJ(22aa-250aa)的基因片段连接到载体pGI01中。重组质粒转化到大肠埃希菌BL21菌株中,扩大培养后,IPTG诱导目的蛋白表达。提取大肠埃希菌表达蛋白并使用镍离子柱进行纯化。结果鼠疫耶尔森菌YopJ密码子优化前YopJ(22aa-288aa)及YopJ(22aa-250aa)在大肠埃希菌内表达水平较低,密码子优化后YopJ(22aa-288aa)及YopJ(22aa-250aa)在大肠埃希菌内大量表达可溶性YopJ蛋白。结论对鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白进行基因密码子优化能够提高其在大肠埃希菌内的表达量。获得的鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白具有可溶性,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

• 单位
  济南大学; 山东省医学科学院基础医学研究所; 山东省医学科学院; 临沂市妇女儿童医院; 生命科学学院