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摘要
目的 构建携带特定酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性克隆，并对拯救病毒的生物学特征进行鉴定。方法 利用分子克隆和反向遗传学技术，在日本脑炎病毒全长感染性克隆pJE70质粒的基础上引入Kpn1单酶切位点，获得pJE70＿Kpn1重组质粒。将质粒线性化后进行体外转录，将转录体RNA转染BHK-21细胞，拯救获得恢复病毒E70-Kpn1。通过间接免疫荧光、蚀斑形成实验、生长曲线测定、小鼠神经毒力评价等方法鉴定恢复病毒E70-Kpn1的生物学特性。结果 成功构建了携带Kpn1的日本脑炎病毒全长感染性克隆，该克隆能拯救出重组的日本脑炎病毒E70-Kpn1，其生物学特征与亲本株E70无显著差异。结论 研究获得携带Kpn1酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性cDNA克隆，并成功拯救获得一株重组日本脑炎病毒，为下一步进行反向遗传学操作提供了可靠的工具。
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单位病原微生物生物安全国家重点实验室
