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摘要
近年我国的水禽养殖业迅速发展,但对于鸭鹅等水禽的疾病防控主要专注于禽流感、新城疫等疾病。自2017年起于我国养鹅场突然爆发的雏鹅痛风至死亡等的疾病,由于缺乏适宜的实验室宿主系统,对病毒的分离鉴定及后续疫苗的开发产生深远影响。因此为便于日后的病毒扩增及深入研究,将原代鹅肾细胞进行永生化培养。研究主要针对鹅构建永生化细胞系,使用22日龄左右鹅胚,处理组织剪碎消化,采用组织块贴壁法培养原代细胞。经感受态细胞扩增PcDNASV40-LT质粒载体,设定引物并用PCR对质粒DNA进行验证,证明质粒扩增表达成功后转染原代培养的鹅肾组织细胞。通过直接接触法进行细胞转染,随后采用抗生素筛选出获得SV40-LT基因表达的阳性细胞,挑取单一转化灶经过多次传代培养,成功建立鹅肾细胞系。
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