缺氧诱导因子-1α通过调控蛋白激酶B/核因子-κB信号通路促进肝癌细胞干细胞标志物CD133的表达

作者：赵金金; 崔非非; 莫清江; 汪磊; 林志强; 张海光; 焦路阳^*

来源：新乡医学院学报, 2022, 39(04): 301-307.

• 肝癌
• 缺氧诱导因子-1α
• 蛋白激酶B
• 核因子-κB
• 干细胞标志物
• CD133

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)诱导肝癌细胞中干细胞标志物CD133表达的分子机制及意义。方法 将HepG2细胞随机分为空白对照组、对照组和实验组，空白对照组HepG2细胞不做转染，对照组和实验组HepG2细胞分别转染空载体慢病毒pHBLV-ZsGreen-Puro和HIF-1α高表达慢病毒pHBLV-HIF1A-3flag-ZsGreen-Puro。使用荧光显微镜观察对照组和实验组细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达，并计算转染效率；采用Western blot法检测3组细胞中HIF-1α蛋白及蛋白激酶B(Akt)/核因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、p-p65、p65蛋白的相对表达量，流式细胞术检测对照组和实验组CD133阳性细胞率。另取实验组细胞随机分为HepG2-HIF-1α组、Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组，Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组细胞分别给予终浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0μmol·L-1 Akt激酶抑制剂及终浓度为3.0、6.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol·L-1 NF-κB信号通路抑制剂干预；采用四甲基偶氮唑盐法检测Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组细胞活力，流式细胞术检测HepG2-HIF-1α组、Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率的变化。结果 对照组和实验组GFP阳性细胞比例显著高于空白对照组(P<0.05);对照组与实验组GFP阳性细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组细胞中HIF-1α相对表达量显著高于空白对照组及对照组(P<0.05);空白对照组与对照组细胞中HIF-1α相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和实验组CD133阳性细胞率分别为(4.42±0.29)%、(15.43±0.41)%,实验组CD133阳性细胞率显著高于对照组(t=22.160,P<0.05)。实验组细胞中p-Akt/Akt、p-p65/p65显著高于对照组(P<0.05)。0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0μmol·L-1Akt激酶抑制剂组细胞活力比较差异无统计学意义(F=1.301,P>0.05);3.0、6.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol·L-1 NF-κB信号通路抑制剂组细胞活力比较差异无统计学意义(F=2.300,P>0.05)。Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率低于HepG2-HIF-1α组(t=10.17 0、8.932,P<0.05);Akt激酶抑制剂组与NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率比较差异无统计学意义(t=1.745,P>0.05)。结论 HIF-1α可通过Akt/NF-κB信号通路促进肝癌细胞中干细胞标志物CD133的表达，增加肝癌细胞的干细胞特性。

• 单位
  新乡医学院第一附属医院