长基因间非编码RNA963不同可变剪接体在胃癌细胞系中的表达和作用

作者：杜洪; 夏万松; 韦四喜; 夏英; 金泳; 李红羽; 袁婷; 黄海

来源：贵州医科大学学报, 2021, 46(07): 759-765.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2021.07.003

• 胃肿瘤
• 基因表达
• 细胞凋亡
• 长基因间非编码RNA963
• 可变剪接体
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目的探讨长基因间非编码RNA963(LINC00963)不同可变剪接体(V)在胃癌(GC)细胞系中的表达和作用。方法取对数生长期的GC细胞系AGS、MKN45、HGC-27、MGC803及胃正常黏膜细胞系GES-1,采用常规聚合酶链式反应(PCR)扩增LINC00963、扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和克隆测序验证LINC00963存在于GC中的多个可变剪接体,采用荧光定量PCR检测上述细胞中LINC00963 V表达量、5'cDNA末端快速扩增技术(5'RACE)分析LINC00963 V的转录起始位点、美国国家生物技术信息中心(NCBI)开放阅读框查找器初步分析不同V蛋白编码能力;取对数生长期GC HGC-27细胞,采用基因沉默技术敲低LINC00963-V1,设对照(si-NC)组和敲低组(si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b),免疫印迹分析各组HGC-27细胞中BCL2相关X凋亡调节因子(Bax)、BCL2凋亡调节因子(Bcl-2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。结果克隆测序及琼脂糖凝胶电泳明确LINC00963基因至少存在3个未见报道的V,分别命名为LINC00963-V1、V2及V3;实时荧光定量PCR结果显示,与GES-1细胞系相比,LINC00963-V1、V2在HGC-27细胞系中高表达(P <0.05); 5'RACE探寻到多个转录起始位点,开放阅读框分析显示新发现的V蛋白编码能力较弱;与si-NC组相比,si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b组HGC-27细胞Caspase-3表达增高、Bcl-2表达降低,si-V1-a组和si-V1-b组Bax表达增高(P <0.05)。结论 LINC00963存在3个及以上未见报道的V,其中V1在GC细胞系中高表达且有抑制肿瘤细胞凋亡相关基因表达的作用。

• 单位
  贵州医科大学; 贵州中医药大学; 第一附属医院检验科