自身反应性CD8~+中心记忆性T细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎致病作用

作者：杨亭亭; 姜红; 向雅娟; 何洋; 刘喷飓; 殷贺; 高旭光; 刘广志^*

来源：中国神经免疫学和神经病学杂志, 2021, 28(02): 93-102.

• 多发性硬化
• 实验性自身免疫性脑脊髓炎
• CD8~+T细胞
• 中心记忆性T细胞
• 过继转移

目的探讨自身反应性CD8~+中心记忆性T细胞(TCM)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的致病作用。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)_(35-55)肽段/完全弗氏佐剂(CFA)乳化液于雌性C57BL/6(B6)小鼠背部4点皮下注射,在0 h(CFA乳化液注射当时)及48 h时间点分别予以百日咳毒素(PTX)腹腔注射,建立EAE模型。于发病高峰期后处死EAE小鼠获取脾脏和淋巴结的单个核细胞(MNC),利用免疫磁珠法经阴性选择纯化CD8~+T细胞;进一步采用流式细胞术分选TCM(CD8~+CCR7~+CD44~(high))。将EAE鼠CD8~+T细胞、健康鼠CD8~+T细胞分别过继转移(经鼠尾静脉注射)至雌性Rag-1~(-/-)小鼠体内(2×10~6/只,n=6),进行Kono评分及病理学检查,以确证CD8~+T细胞的致病性;进一步对EAE鼠CD8~+T细胞不同亚群进行致病性研究,分为CD8~+TCM常规剂量组(5×10~5/只,n=6)、CD8~+终末效应记忆性T细胞(Ter TEM,5×10~5/只,n=6)组、磷酸缓冲盐溶液(PBS,n=6)组及CD8~+TCM高剂量组(1.5×10~6/只,n=3),分别将不同剂量CD8~+ TCM、Ter TEM以及PBS相应细胞/溶液注射于Rag-1~(-/-)小鼠;予以MOG_(35-55)/CFA和PTX诱导,进行神经功能评分;于过继转移后第40 d处死小鼠,检测其病理学改变。结果将EAE鼠CD8~+T细胞过继转移至Rag-1~(-/-)小鼠体内,在27 d～29 d后出现双后肢瘫痪症状,病理学显示脑/脊髓内炎性细胞浸润和脱髓鞘改变,而健康鼠CD8~+T细胞过继转移后小鼠无瘫痪症状,病理学检查亦未见EAE相关病理学改变。EAE鼠CD8~+TCM常规剂量组及高剂量组、Ter TEM组、PBS组注射后持续观察40 d则均未出现发病症状,脑/脊髓亦未见及EAE相关的病理学改变。结论 EAE自身反应性CD8~+T细胞的过继转移可诱导Rag-1~(-/-)小鼠发病,而自身反应性CD8~+TCM的过继转移则未能诱导出EAE病症及其相应的病理学改变,提示CD8~+TCM缺乏明显的EAE致病效应。

• 单位
  北京大学人民医院; 首都医科大学附属北京安贞医院; 第一附属医院神经内科; 清华大学