二苯乙烯苷调控CREB/BDNF信号通路对Aβ25-35损伤的小鼠神经元突触的保护作用

作者：闫宇辉^*; 朱濛; 李红艳; 卢营博

来源：中国实验方剂学杂志, 2019, 25(17): 50-56.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20191736

• 二苯乙烯苷
• β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)
• 突触
• 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子信号通路

目的:研究中药何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤的小鼠海马神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:小鼠海马神经元细胞分离自新生48 h内胎鼠大脑海马,培养9 d待神经元成熟后,采用免疫荧光法对其进行鉴定。将培养成熟的神经元细胞分为正常组、模型组(Aβ25-35孵育造模)和TSG组(Aβ25-35孵育造模后,分别加入TSG 6.25,12.5,25,50,100μmol·L-1)。细胞增殖毒性检测(CCK-8)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞活性,免疫荧光法检测突触素-1(SYN-1)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测突触后膜致密蛋白-95(PSD-95)和突触体素(SYP)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达,免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB,磷酸化CREB(p-CREB)和BDNF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低,LDH释放量显著增高(P<0.01),SYN-1,PSD-95和SYP的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达明显下调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,不同浓度TSG均可提高细胞存活率,降低LDH释放量(P<0.05,P<0.01),TSG对Aβ25-35造模的小鼠海马神经元细胞的最适治疗浓度为25μmol·L-1; 25μmol·L-1TSG能够显著增强SYN-1的表达量(P<0.01),明显提高PSD-95和SYP的含量(P<0.05);上调p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),但对CREB mRNA及蛋白的表达无显著影响。结论:TSG对Aβ25-35损伤的小鼠海马神经元突触具有保护作用,其机制可能与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并促进神经营养因子BDNF的释放有关。

• 单位
  江苏食品药品职业技术学院; 辽宁中医药大学