人可溶性TRAIL基因的克隆及其在毕赤酵母中的重组表达

作者：李莹莹; 万琳; 杨浩; 刘珊; 蔡华伟; 卢晓风

来源：生物医学工程学杂志, 2010, (06): 1307-1311+1326.

• TRAIL
• 细胞凋亡
• 肿瘤治疗
• 毕赤酵母 TRAIL
• Apoptosis
• Cancer therapy
• Pichia pastoris

TRAIL是肿瘤坏死因子TNF家族成员,对肿瘤细胞具有高效和选择性杀伤活性,可能发展为新型抗肿瘤药物。基因重组表达是生产蛋白药物的重要手段。本文首先通过PCR扩增获得人可溶性TRAIL(114~281氨基酸组成的片段)基因,然后将其插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中进行表达。结果发现,经G418筛选获得的高拷贝转化子,在含有3%甲醇的BMMY培养基中,人可溶性TRAIL获得高效分泌表达。表达产物经Ni-Agarose亲和层析,纯度大约为80%,产量可达1~2 mg/L。细胞毒性实验表明,0.05μg/ml可溶性TRAIL对白血病细胞Jurkat有很强的杀伤活性,细胞存活率只有10%。0.1μg...

• 单位
  生命科学学院; 四川大学华西医院; 四川大学