VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定

作者：余榕捷; 高媛; 戴云; 谭毅力; 曾志宏; 周天鸿; 洪岸

来源：生物工程学报, 2006, 22(6): 996-1001.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3061.2006.06.022

• VPAC2
• 中国仓鼠卵巢细胞
• 表达

PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide ,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能.为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,将pcDNA-VPAC2表达载体转染CHO细胞,G418筛选转染阳性克隆,PACAP38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内cAMP生成,筛选出对PACAP38最为敏感的阳性单克隆细胞株(VPAC2-CHO),运用RT-PCR、Western blot和免疫荧光法检测VPAC2受体表达情况,利用VPAC2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使cAMP生成的活性检测实验证实, VPAC2-CHO特异表达有功能的VPAC2.Scatchard作图分析显示VPAC2-CHO的VPAC2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38与VPAC2的解离常数Kd值为(0.55±0.10)nmol/L.特异表达VPAC2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发VPAC2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础.

• 单位
  暨南大学; 河北医科大学