重组酶聚合酶等温扩增快速检测肺炎支原体方法的建立和初步应用

作者：杨永强; 龙炫辉; 魏涛; 邓宁波; 桑晔; 唐文志

来源：现代生物医学进展, 2021, 21(11): 2169-2173+2178.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2021.11.037

• 重组酶聚合酶扩增技术
• 肺炎支原体
• 反应体系
• 建立
• 应用

目的:建立基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)技术快速检测肺炎支原体的方法。方法:本研究以肺炎支原体编码P1黏附蛋白为靶基因,利用Primer Premier 5软件进行引物、探针的设计,最终筛选出最佳引物。同时设计相应的实时荧光定量PCR(RT-PCR)引物用于后续的验证试验。对反应体系试剂比例、反应时间、反应温度、引物探针浓度进行确定。肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、肺炎克雷伯菌、肺炎双球菌、大肠杆菌和链球菌作为对照评估RPA检测肺炎支原体的特异性及敏感度。结果:RPA快速检测肺炎支原体方法仅需14 min,检测灵敏度达200 copies/mL;6种非肺炎支原体均不能扩增,特异性较高。结论:本研究建立了肺炎支原体的RPA快速检测方法,具有迅速、简便、经济等优势,为肺炎支原体的快速检测提供一个新的有利工具。

• 单位
  广东省中医院珠海医院